旋毛虫LAMP检测方法的建立与应用

作     者：黄芸 徐立新 宋小凯 李祥瑞 严若峰 HUANG Yun;XU Li-xin;SONG Xiao-kai;LI Xiang-rui;YAN Ruo-feng

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

基　　金：江苏省自然科学基金项目(BK20141365) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2017年第47卷第4期

页      码：461-465页

摘      要：为建立一种快速、准确的动物肉品中旋毛虫检测方法,根据旋毛虫ITS-Ⅱ基因序列,设计环介导等温扩增技术(loop-m ediated isothermal amplification,LAMP)引物,进行LAMP扩增。将旋毛虫DNA进行梯度稀释,以其为模板分别进行LAMP和常规PCR扩增,分析LAMP检测技术的敏感性。分别以旋毛虫、弓形虫、捻转血矛线虫、柔嫩艾美耳球虫、猪囊尾蚴、大肠杆菌等病原的基因组DNA为模板,进行LAMP检测,分析该检测方法的特异性。用该LAMP检测方法,分别对模拟样品和市售猪舌、鸭舌、鸡舌、羊舌和牛舌等110份样品进行旋毛虫感染情况检测。LAMP扩增产物的电泳结果和可视化SYBR G reen I荧光染料颜色的变化均表明该LAMP检测方法建立成功。当模板DNA稀释到10^(12)时亦可以检测,其敏感性是常规PCR的1 000倍。特异性研究发现,只有以旋毛虫基因组DNA为模板所进行的LAMP检测才出现阶梯形的电泳条带并且其SYBR Green I荧光染料呈现绿色荧光。在2 g肌肉中添加1条旋毛虫肌幼虫时亦能被该LAMP方法检测出来。但110份舌肌样品中均未检测到旋毛虫,LAMP检测结果与常规PCR结果一致。结果表明,本研究建立了基于旋毛虫ITS-Ⅱ基因的LAMP检测技术,该技术具有较好的敏感性和特异性,在样品检测中具有简便快捷的优点。

主 题 词：旋毛虫 ITS-Ⅱ 环介导等温扩增技术 敏感性 特异性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.04.009

馆 藏 号：203226891...