捻转血矛线虫精氨酸激酶基因的克隆与表达及酶活性分析

作     者：马春晓 张振超 李祥瑞 徐立新 宋小凯 严若峰 MA Chunxiao;ZHANG Zhenchao;LI Xiangrui;XU Lixin;SONG Xiaokai;YAN Ruofeng

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金(KYZ201315) 国家自然科学基金项目(31001059) 

出 版 物：《南京农业大学学报》 (Journal of Nanjing Agricultural University)

年 卷 期：2014年第37卷第3期

页      码：100-106页

摘      要：根据捻转血矛线虫精氨酸激酶(arginine kinase,AK)基因序列设计1对特异性引物进行RT-PCR,将得到的片段克隆到pMD19-T载体后进行序列测定和分析;将该基因的开放阅读框克隆到pET-32a(+)载体中,获得原核表达质粒pET32/AK并转化大肠杆菌BL21;重组子用IPTG诱导后用SDS-PAGE分析其表达情况;对重组蛋白变性、纯化后用梯度尿素对其进行连续透析复性,对复性后的重组蛋白用定磷法进行精氨酸激酶活性分析。结果表明从捻转血矛线虫总RNA中扩增出大小约为1 104 bp的DNA片段。该基因与GenBank中捻转血矛线虫AK基因的相似性为89%。SDS-PAGE电泳结果表明该基因获得了表达,重组融合蛋白相对分子质量大小约为60.3×103,主要以包涵体形式存在。Western blot分析显示该重组蛋白可被人工感染捻转血矛线虫山羊的血清所识别。重组蛋白具有一定的酶活性,其最佳反应温度和pH值分别为30℃和7.5。结论:该重组蛋白表达成功并具有一定的抗原性和激酶活性。

主 题 词：捻转血矛线虫 精氨酸激酶 基因克隆 酶活性 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.7685/j.issn.1000-2030.2014.03.015

馆 藏 号：203227612...