基于ORF3蛋白的PCV2间接ELISA诊断方法的建立

作     者：李春燕 刘梦茜 陈仕怡 袁晓琴 星东 庄育彬 王全溪 LI Chun-yan;LIU Meng-xi;CHEN Shi-yi;YUAN Xiao-qin;XING Dong;ZHUANG Yu-bin;WANG Quan-xi

作者机构：福建农林大学动物科学学院福建福州350002 福建农林大学福建省兽医中药与动物保健重点实验室福建福州350002 

基　　金：福建农林大学科学发展基金项目(KF2015094) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2017年第47卷第4期

页      码：427-434页

摘      要：ORF3蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type,2PCV2)的一个重要的非结构蛋白。根据GenBank数据库中PCV2的ORF3基因序列设计引物,以PCV2基因组为模板进行PCR扩增,并构建重组表达质粒。将重组质粒转染至BL21感受态细胞,进行最佳诱导条件的选择,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组ORF3蛋白作为酶标包被抗原,优化反应条件,建立PCV2间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)诊断方法。结果显示,重组质粒经PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定构建成功。重组蛋白表达的最佳诱导条件为37℃、8 h、1 mmol/LIPTG。Western-blot结果表明,该重组蛋白具有较好的免疫原性。Ni-NTA亲和层析纯化结果表明,280 mmol/L咪唑为最佳洗脱浓度。iELISA的最佳包被抗原质量浓度为0.03 mg/m L,待检血清最佳稀释度为1∶100,酶标抗体最佳工作浓度为1∶4 000。批内和批间试验结果表明,该方法具有较好的重复性。此iELISA与PCR检测方法具有良好的一致性。结果表明,基于ORF3蛋白建立的PCV2间接ELISA诊断方法,可以为临床上rCap蛋白基因工程疫苗免疫猪场进行鉴别诊断。

主 题 词：猪圆环病毒2型 ORF3 原核表达 间接ELISA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.04.004

馆 藏 号：203228083...