PRMT2及其剪接体在乳腺癌MCF-7细胞中的亚细胞定位及意义

作     者：陈亚军 钟警 杨靖 文格波 

作者机构：南华大学附属第一医院临床医学研究所衡阳421001 南华大学附属第二医院内分泌科衡阳421001 南华大学病理生理学教研室衡阳421001 

基　　金：国家自然科学基金青年基金资助项目(编号:31200573) 湖南省自然科学基金资助项目(编号:13JJ6051) 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2015年第50卷第4期

页      码：423-426页

摘      要：目的构建蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)及其差异剪接体与绿色荧光蛋白(GFP)的真核表达载体,转染后观察其融合蛋白在乳腺癌MCF-7细胞中的表达及亚细胞定位,为进一步研究PRMT2基因及其新的差异剪接体在乳腺癌中的作用奠定基础。方法以p GEM-T-PRMT2/α/β/γ载体为模板,设计引物,PCR扩增目的基因,并将PCR产物克隆至pc DNA3.1/NT-GFP-topo载体,转化后将阳性克隆扩增,对PCR产物进行跑胶鉴定和测序。提取pc DNA3.1/NT-GFP-PRMT2/α/β/γ及空载体pc DNA3.1/NT-GFP质粒,用脂质体介导转染MCF-7细胞,在激光共聚焦显微镜下,观察外源性PRMT2/α/β/γ融合蛋白在MCF-7细胞中的亚细胞定位。采用Western blot法检测各重组融合蛋白在MCF-7细胞中的表达。结果各GFP在细胞中均有表达,但其在细胞中的分布位置不一致。PRMT2α与PRMT2γ的融合蛋白同PRMT2的分布一致,均聚集于核仁外的核浆,胞质中有少许分布;而PRMT2β和空载体的荧光蛋白的分布一致,都均匀分布于细胞的胞质和胞核,包括核仁部分。Western blot法检测表明各重组融合蛋白在MCF-7细胞中均有表达。结论PRMT2及其各剪接体的亚细胞定位不同,可能提示其在功能方面存在差异。

主 题 词：乳腺癌 蛋白质精氨酸甲基转移酶2 剪接体 亚细胞定位 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2015.04.004

馆 藏 号：203228133...