CRISPR/Cas9介导CPED1基因敲除载体活性的验证

作     者：王飞 何娜娜 王颖洁 纪艳芹 张亚妮 李碧春 WANG Fei;HE Nana;WANG Yingjie;JI Yanqin;ZHANG Yani;LI Bichun

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 

基　　金：国家自然科学基金项目(31472087) 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2017年第39卷第7期

页      码：11-14页

摘      要：试验旨在利用CRISPR/Cas9技术分别在鸡成纤维细胞DF-1和鸡胚胎干细胞(Em-bryomic stem cell,ESCs)上介导CPED1基因敲除,以期为后续研究CPED1基因功能提供技术依据。克隆CPED1基因全长;构建cas9/g RNA载体并转染DF-1和ESCs,经流式分选阳性细胞,采用T7E1酶切法选择活性最佳的敲除载体并分析其敲除效率;同时,对DF-1中的脱靶效率进行检测。结果成功克隆鸡CPED1基因,并构建3个cas9/g RNA载体;T7E1酶切结果表明cas9/g RNA1载体在DF-1阳性细胞中的敲除活性(37%)最佳,该载体也可定点敲除ESCs中的CPED1基因,敲除活性为25%,且在DF-1细胞中未发生脱靶。表明CRISPR/Cas9可有效介导鸡CPED1基因在DF-1和ESCs上敲除。

主 题 词：CRISPR/Cas9技术 CPED1基因 鸡 敲除载体 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 090501[090501] 

D　O　I：10.16372/j.issn.1004-6364.2017.07.003

馆 藏 号：203230467...