榴莲蜜基因组DNA提取方法比较及SCoT反应体系的优化

作     者：崔健 胡福初 陈哲 郭利军 段恋 范鸿雁 何凡 Cui Jian;Hu Fuchu;Chen Zhe;Guo Lijun;Duan Lian;Fan Hongyan;He Fan

作者机构：海南大学热带农林学院海口570228 海南省农业科学院热带果树研究所海南省热带果树生物学重点实验室农业部海口热带果树科学观测试验站海口571100 

基　　金：海南省省属科研院所技术开发研究专项(KYYS-2015-07 KYYS-2016-09) 农业部热带作物种质资源保护项目(16RZZY-107) 国家热带作物种质资源平台(菠萝蜜种质资源整理,整合及共享运行服务)共同资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2017年第15卷第4期

页      码：1338-1346页

摘      要：本研究以榴莲蜜(Artocarpus integer(Thunb.)Merr.)品种‘多异1号’嫩叶为试材,通过比较5种CTAB法,提取到高质量的榴莲蜜基因组DNA,利用正交设计L25(56)探究了Mg^(2+)、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物及模板DNA用量对榴莲蜜SCoT-PCR反应的影响,在此基础上对退火温度进行了优化,建立了SCoT反应体系。结果表明:使用含有4%β-巯基乙醇和12.5 mmol/L硼砂的2%CTAB提取缓冲液,两次抽提后用1/2体积无水乙醇和与上清等体积的4 mol/L LiCl沉淀RNA,能够提取到高质量的基因组DNA;优化后的20μL榴莲蜜SCoT-PCR反应体系含有Mg^(2+) 2 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶1 U、引物0.375 mol/L、模板DNA 10 ng,最适退火温度48.2℃。该体系可以为榴莲蜜遗传多样性分析、基因定位等提供技术支持。

主 题 词：榴莲蜜 DNA提取 SCoT PCR反应体系 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090102[090102] 090201[090201] 

核心收录：

D　O　I：10.13271/j.mpb.015.001338

馆 藏 号：203230893...