多靶点CRISPR表达载体系统的设计和构建

作     者：王令 郭苗苗 杜伟立 杨理凯 胡重洋 张涛 路宏朝 Wang Ling;Guo Miaomiao;Du Weili;Yang Likai;Hu Chongyang;Zhang Tao;Lu Hongzhao

作者机构：陕西理工大学生物科学与工程学院汉中723001 

基　　金：国家自然基金项目(31402071) 陕西理工大学人才启动项目(SLGQD14-02)共同资助 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2017年第36卷第4期

页      码：1518-1525页

摘      要：CRISPR/Cas9核酸酶系统能实现多基因的高效靶向编辑,但是多靶点CRISPR表达载体的构建比较复杂。本研究以细菌的DNA旋转酶和二氢叶酸还原酶为靶基因,选择多个打靶位点,合成携带靶序列和多克隆位点的寡聚核苷酸引物,直接退火延伸合成靶序列DNA,利用同尾酶产生相同粘性末端的特点,将靶序列克隆至骨架载体,然后依次加入更多靶序列,实现多靶点的串联。最后测序验证,单靶点、双靶点和三靶点成功插入CRISPR表达载体,同时保留了多克隆位点,实现多靶点串联。本研究设计的多靶点CRISPR表达载体系统操作简单、成本低、成功率高,为后续细菌多基因编辑提供技术支撑,同时可拓展应用于其他生物多基因打靶研究。

主 题 词：CRISPR系统 多靶点 表达载体 同尾酶 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13417/j.gab.036.001518

馆 藏 号：203231198...