小反刍兽疫N5蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

作     者：刘斌 陈晓宇 牟筱 黄银君 牟克斌 祁光宇 许涛 胡永浩 LIU Bin;CHEN Xiao-yu;MU Xiao;HUANG Yin-jun;MU Ke-bin;QI Guang-yu;XU Tao;HU Yong-hao

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中农威特(天津)生物医药有限责任公司天津300301 兰州市城关区动物疫病预防控制中心甘肃兰州730030 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046 

基　　金：甘肃省科技计划资助项目(1104NKCA167) 天津市支持科研院所来津发展项目(16PTYJNC00060) 

出 版 物：《甘肃农业大学学报》 (Journal of Gansu Agricultural University)

年 卷 期：2017年第52卷第2期

页      码：1-6页

摘      要：【目的】建立一种适用于PPRVN蛋白抗体的间接ELISA检测方法,应用于PPR防疫.【方法】根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,设计1对特异引物对N5基因扩增,经测序分析后将N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,成功构建pET-32a-N5质粒.将pET-32a-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,重组蛋白分析具有良好的反应原性.【结果】利用原核表达纯化的PPRV N重组蛋白作为包被抗原,初步建立了一种能够检测针对PPRV N蛋白抗体的间接ELISA方法.用建立的方法对112山羊份血清进行了抗体检测,该方法与竞争ELISA试剂盒对比,临床符合率94.8%.【结论】该方法具有较好的敏感性、重复性和特异性.

主 题 词：小反刍兽疫 N5基因 间接酶联免疫吸附试验 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13432/j.cnki.jgsau.2017.02.001

馆 藏 号：203231292...