啮齿柠檬酸杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：冯洁 谢建云 张泉 魏晓锋 胡建华 高诚 FENG Jie;XIE Jian-yun;ZHANG Quan;WEI Xiao-feng;HU Jian-hua;GAO Cheng

作者机构：扬州大学兽医学院江苏扬州225009 上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站上海201203 

基　　金：上海市科技创新行动计划(14140900600) 上海市科委研发平台专项(15DZ2292400) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2017年第39卷第5期

页      码：393-397页

摘      要：为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(***)esp B基因的方法,本研究根据Gen Bank中登录的*** esp B基因序列设计1对特异性引物,建立了*** SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,在102拷贝/μL^108拷贝/μL浓度范围内标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系。该方法仅对***进行特异性扩增,而对牛棒状杆菌、鼠伤寒沙门菌、嗜肺巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。其检测灵敏度可达24拷贝/μL。组内和组间试验变异系数均小于1%,重复性良好。临床样品初步应用结果显示,荧光定量PCR阳性检出率为56.36%(31/55),常规PCR阳性检出率为30.91%(17/55),二者符合率为74.55%。本研究建立的*** SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法为实验动物***的检测和流行病学调查提供了技术支撑。

主 题 词：啮齿柠檬酸杆菌 SYBR Green I 荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j,issn.1008-0425.2017.05.13

馆 藏 号：203232016...