β-catenin siRNA慢病毒载体的构建及其对A549耐药细胞生长及自噬的影响

作     者：宋萍 连小怡 郑金旭 葛莉萍 刘超 蒋婷 朱黎容 丁明 SONG Ping;LIAN Xiao-yi;ZHEN Jin-xu;GE Li-ping;LIU Chao;JIANG Ting;ZHU Li-rong;DING Ming

作者机构：江苏大学附属医院呼吸内科江苏镇江212001 

基　　金：镇江市科技计划项目(SH2013033) 江苏大学附属医院博士启动基金资助项目(jdfyRc2015013) 

出 版 物：《江苏大学学报（医学版）》 (Journal of Jiangsu University：Medicine Edition)

年 卷 期：2017年第27卷第3期

页      码：213-218页

摘      要：目的:通过构建β-catenin siRNA慢病毒表达载体,研究Wnt信号通路与顺铂诱导非小细胞肺癌耐药的相关机制。方法:根据β-catenin基因mRNA序列,设计并合成3对shRNA序列,退火形成双链DNA,与慢病毒载体pLentiLox3.7连接、转化,挑取阳性克隆进行测序鉴定;转染293T细胞,包装产生慢病毒,检测滴度;感染A549细胞,筛选出有效抑制靶点;将慢病毒感染A549/DDP耐药细胞株24 h后,用不同浓度的顺铂干预48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;根据细胞预先有无慢病毒感染,分为A549组、A549/DDP组、A549/DDP+siRNA组、A549/DDP+siNC组,用8μg/m L顺铂处理各组细胞,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法测定各组细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Wnt信号通路关键因子β-catenin表达水平。结果:经DNA测序鉴定,成功构建β-catenin siRNA慢病毒载体,并筛选出有效抑制靶点;相同浓度下顺铂对A549细胞抑制作用明显大于A549/DDP细胞(P<0.05),对A549/DDP+siRNA组细胞的抑制作用也强于A549/DDP细胞;8μg/m L顺铂干预后,A549/DDP组β-catenin及LC3Ⅱ的表达明显高于A549组(P<0.05),而A549/DDP+siRNA组β-catenin和LC3Ⅱ表达较A549/DDP组减少。结论:Wnt信号通路参与非小细胞肺癌对顺铂产生的耐药,该过程与细胞产生自噬有关。

主 题 词：肺癌 Wnt信号通路 耐药 自噬 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13312/j.issn.1671-7783.y160246

馆 藏 号：203232574...