CRISPR/Cas9系统对斑马鱼fhl1a基因敲除有效性的研究

作     者：陈思行 陈发 蔡湾湾 吴燕 廖艳伟 邓云 吴秀山 王跃群 CHEN Si-xing;CHEN Fa;CAI Wan-wan;WU Yan;LIAO Yan-wei;DENG Yun;WU Xiu-shan;WANG Yue-qun

作者机构：湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31272396 31572349) 湖南省生物发育工程及新产品研发协同创新中心资助项目(2013-448-6) 

出 版 物：《湖南师范大学自然科学学报》 (Journal of Natural Science of Hunan Normal University)

年 卷 期：2017年第40卷第3期

页      码：21-26页

摘      要：为研究fhl1a基因在心脏发育中的作用,利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼fhl1a基因.在斑马鱼fhl1a基因的三号外显子处选取打靶位点,构建sgRNA表达载体.将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA混合物分别显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中以期实现对目的靶基因fhl1a的敲除.随后收集部分72 h胚胎进行PCR检测和产物直接测序,确定有无突变.为进一步验证突变是否可稳定遗传,选择具有敲除了的F_0与野生型斑马鱼进行外交,对获得的F_1进行逐一剪尾,提取DNA进行PCR和测序分析.结果显示F_1获得了不同程度的插入、缺失等突变类型.研究结果证明所设计的fhl1a基因CRISPR/Cas9敲除系统能在斑马鱼体内有效地形成基因突变,该突变能稳定地遗传到下一代个体,这为进一步研究fhl1a基因在心脏发育中的具体调控机制打下了基础.

主 题 词：CRISPR/Cas9 fhl1a基因 斑马鱼 敲除 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.7612/j.issn.1000-2537.2017.03.004

馆 藏 号：203233628...