缺氧对人真皮成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化的影响及其机制

作     者：赵彬 韩夫 张伟 王许杰 张健 杨芳芳 石继红 苏琳琳 胡大海 Zhao Bin Han Fu Zhang Wei Wang Xufie Zhang Jian Yang Fangfang Shi Ji- hong Su Linlin Hu Dahai

作者机构：第四军医大学西京医院全军烧伤中心烧伤与皮肤外科西安710032 

出 版 物：《中华烧伤杂志》 (Chinese Journal of Burns)

年 卷 期：2017年第33卷第6期

页      码：368-373页

摘      要：目的探讨缺氧对人真皮Fh向肌Fh表型转化的影响及其机制。方法取对数生长期第3代健康成人真皮Fb，用含体积分数10％FBS的DMEM培养基培养，进行以下5项实验。（1）实验1、2、3均将所取细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组，每组10皿。常氧组细胞于含体积分数21％氧气环境中培养，缺氧组细胞于含体积分数1％氧气环境中培养。培养0、48h，2组分别取5皿细胞，实验1用实时荧光定量RT—PCR法检测细胞中肌Fh标志物α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达，实验2用蛋白质印迹法检测细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达，实验3用蛋白质印迹法检测细胞中NF-κB蛋白表达。（2）实验4将细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组、缺氧＋吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组，每组5皿。前2组细胞同实验1处理，缺氧＋PDTC组细胞同缺氧组细胞处理并在培养基中加入4mL终物质的量浓度为10μmol／LPDTC。培养48h，蛋白质印迹法检测各组细胞中NF—κB蛋白表达。（3）实验5将细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组、缺氧＋PDTC组、常氧＋PDTC组，每组5皿。前3组细胞均同实验4处理，常氧＋PDTC组细胞同常氧组细胞处理并在培养基中加入4mL终物质的量浓度为10μmol／LPDTC。培养48h，蛋白质印迹法检测各组细胞中α—SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD—t检验。结果（1）与常氧组相应时相点比较，缺氧组Fb培养0h时α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达量以及NF-κB蛋白表达量均无明显变化（t值为-1．21～2．04，P值均大于0．05），培养48h时α—SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达量以及NF—κB蛋白表达量均显著升高（t值为-12．57～-3．44，P值均小于0．01）。（2）培养48h，缺氧组Fh中NF—κB的蛋白表达量为0．83±0．12，显著高于常氧组的0．17±0．06（t=-16．96，P〈0．001）；缺氧＋PDTC组Fh中NF—κB蛋白表达量为0．31±0．08，显著低于缺氧组（t=12．73，P〈0．001）。（3）培养48h，缺氧组Fb中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．73±0．09、1．25±0．10、1．16±0．07，显著高于常氧组的0．14±0．06、0．87±0．08、0．77±0．13（t值为9．24—11．24，P值均小于0．001）；常氧＋PDTC组Fh中α—SMA蛋白表达量为0．24±0．07，显著高于常氧组（t=4．22，P〈0．01），Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．25±0．06、0．32±0．11，显著低于常氧组（t值分别为-4．31、-3．88，P值均小于0．01）；缺氧＋PDTC组F11中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达量分别为0．09±0．08、0．38±0．12、0．47±0．08，显著低于缺氧组（t值为11．78～22．98，P值均小于0．001）。结论缺氧能够显著上调人真皮Fb中α—SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达，其可能促进了Fb向肌Fb的表型转化，且可能与NF—κB信号通路的激活有关。

主 题 词：缺氧 成纤维细胞 NF—κB 肌成纤维细胞 表型转化 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2017.06.016

馆 藏 号：203233740...