猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

作     者：杨德强 李慧春 陈鹏飞 王康 李先斌 张文超 虞凌雪 姜一峰 高飞 黄勤峰 于海 童光志 周艳君 YANG De-qiang LI Hui-chun CHEN Peng-fei WANG Kang LI Xian-bin ZHANG Wen-cha YU Ling-xue JIANG Yi-feng GAO Fei HUANG Qin-feng YU HaiI TONG Guang-zhi ZHOU Yan-jun

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 

基　　金：国家自然科学基金项目(31472207) 国家重点研发计划项目(2016YFD0500100) 国家生猪现代产业技术体系建设项目(CARS-36) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2017年第25卷第3期

页      码：18-22页

摘      要：本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重组质粒转化*** DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒r Bacmid-S1,再将重组穿梭质粒r Bacmid-S1转染Sf9细胞,48 h后即可观察到明显的细胞病变。将收获的r Bac-S1-P1代病毒在Sf9细胞上连续传3代后,收获细胞培养物,分别用间接免疫荧光鉴定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,P3代重组病毒r Bac-S1感染的细胞均呈现亮绿色荧光,证实表达产物可以被PEDV阳性血清和抗S1蛋白的单抗特异性识别;SDS-PAGE电泳结果显示在大约120 k Da左右可观察到特异性条带;Western blot结果证实该蛋白可以被抗S1蛋白的特异性单抗识别。综上研究结果,证明利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中成功表达了PEDV的S1蛋白,为进一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础。

主 题 词：猪流行性腹泻病毒 S1蛋白 杆状病毒 Sf9细胞 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203233898...