独行菜LaMK基因克隆、生物学信息分析及原核表达

作     者：赵乐 马利刚 俎梦航 冯卫生 郑晓珂 ZHAO Le;MA Li-gang;Zu Meng-hang;FENG Wei-sheng;ZHENG Xiao-ke

作者机构：河南中医药大学药学院郑州450046 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心郑州450046 

基　　金：国家重点基础研究发展计划"973计划"项目(2013CB531802) 河南省科技攻关计划(162102310468) 河南中医学院博士科研基金(BSJJ2011-07) 

出 版 物：《中国药学杂志》 (Chinese Pharmaceutical Journal)

年 卷 期：2017年第52卷第11期

页      码：924-930页

摘      要：目的克隆独行菜强心苷生物合成途径关键酶甲羟戊酸激酶(mevalonate kinase,MK)基因,进行生物信息学分析,原核表达、纯化和组织特异性分析。方法通过分析独行菜转录组数据,设计基因特异性引物,克隆了LaMK基因的cDNA序列,构建p ET-32a-La MK原核表达载体,诱导表达LaMK重组蛋白。结果 LaMK基因的开放阅读框(opening reading frame,ORF)全长为1 137 bp,编码379个氨基酸。生物信息学分析显示,La MK蛋白可能定位于细胞质中,没有跨膜区不含信号肽,含有GHMP激酶家族保守结构域和ATP结合位点。系统进化分析显示,La MK蛋白与拟南芥等十字花科植物的MK蛋白同源性较高。在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达La MK重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱得到了纯化的La MK重组蛋白。荧光定量PCR结果表明,LaMK基因在花中表达量最高,叶和根中次之,茎中较低,在幼苗中表达量最低。结论本实验为下一步制备La MK蛋白抗体,研究La MK基因在独行菜强心苷生物合成途径中的功能奠定了基础。

主 题 词：独行菜 LaMK基因 基因克隆 生物信息学分析 原核表达 

学科分类：1008[医学-中药学类] 1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 1002[医学-临床医学类] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.11669/cpj.2017.11.004

馆 藏 号：203234003...