结核分枝杆菌持留相关PcaA和Acr蛋白的表达纯化及初步应用

作     者：刘毅 张旭霞 张雨晴 姚丛 李传友 Liu Yi;Zhang Xuxia;Zhang Yuqing;Yao Cong;Li Chuanyou

作者机构：北京市结核病胸部肿瘤研究所首都医科大学附属北京胸科医院细菌免疫室耐药结核病研究北京市重点实验室101149 

基　　金：首都卫生发展科研专项(2014-4-2163) 北京市医院管理局青苗计划(QML20161601) 

出 版 物：《国际呼吸杂志》 (International Journal of Respiration)

年 卷 期：2017年第37卷第10期

页      码：732-736页

摘      要：目的结核分枝杆菌（***）潜伏感染状态是造成结核病诊断和研究的难点之一,目前的检测方法很难将潜伏感染结核病（LTBI）和活动性结核病（ATB）区分开.有文献报道分枝菌酸环丙烷合成酶（PcaA）和小分子热休克晶体蛋白（Acr）两个基因在***持留状态下高表达,因此可能和菌的潜伏感染相关,有作为新的诊断靶标的可能,因此我们对它们开展了有关的研究和应用,以期为LTBI的诊断提供新的研究方向和方法.方法首先针对目的基因设计引物,从基因组上扩增其全序列,构建克隆和表达载体,纯化分离蛋白.将蛋白作为抗原应用于免疫学的检测,用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测血清中两种蛋白抗体的表达水平,最终经过统计学处理,分析LTBI和ATB患者之间的血清学的差异,寻找可应用于临床诊断分析的方法和策略.结果成功构建PcaA和Acr蛋白的克隆和表达载体,并获得表达和纯化的蛋白.血清的PcaA和Acr抗体水平检测结果显示健康对照（HC）与ATB之间差异有统计学意义,而ATB和LTBI之间差异并无统计学意义,即使将两个蛋白检测结果进行并联分析后也未显示差异有统计学意义.结论PcaA和Acr蛋白可以在大肠杆菌中成功表达并顺利纯化,PcaA蛋白有较高的抗原特异性和免疫反应性,可用于以后对结核病的检测分析中;虽然用血清学诊断时不能完整的区分LTBI和ATB,但可用于鉴别结核分枝杆菌感染与否.

主 题 词：分枝杆菌,结核 潜伏感染 持留 蛋白表达 血清学 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-436X.2017.10.003

馆 藏 号：203234030...