生物合成γ-氨基丁酸酿酒酵母谷氨酸脱羧酶基因的克隆与表达

作     者：乌云达来 张博润 郭雪娜 王肇悦 Wuyundalai;ZHANG Borun;GUO Xuena;WANG Zhaoyue

作者机构：内蒙古农业大学食品科学与工程学院内蒙古呼和浩特010018 中国科学院微生物研究所北京100101 

基　　金：内蒙古自治区应用技术研发资金计划项目(20130438) 内蒙古自然科学基金面上项目(2014MS0358) 

出 版 物：《食品科学》 (Food Science)

年 卷 期：2015年第36卷第13期

页      码：131-136页

摘      要：为了提高酵母菌的γ-氨基丁酸产量,本研究以十六烷基三甲基溴化铵法(hexadecyl trimethy ammonium bromide,CTAB)提取的酿酒酵母28基因组DNA为模板,扩增得到序列长度为1 758 bp的GAD1基因,经比对与*** S288c的一致性达到98.58%,并设计引物扩增包括GAD1基因上游启动子及调控序列,下游终止子在内的全长基因序列,长度为3 490 bp。将全长基因序列克隆至高拷贝质粒p UG6,构建重组质粒p28。以菌株28作为出发菌株进行转化,经G418抗性筛选得到转化子,进一步经过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)实验验证,质粒提取及酶切验证,确证得到重组子DL28。经重组质粒p28的特性研究得知,重组质粒p28具有良好的遗传稳定性,无抗性传代培养10次重组质粒不丢失。转化后进行酶活力测定,重组子DL28的谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)酶活力比菌株28提高73.8%。通过以上实验结果得出结论,GAD基因高表达菌株DL28具有更高的G418抗性和GAD酶活性。

主 题 词：酿酒酵母菌 γ-氨基丁酸 谷氨酸脱羧酶 克隆 表达 

学科分类：08[工学] 082203[082203] 0822[工学-核工程类] 

D　O　I：10.7506/spkx1002-6630-201513025

馆 藏 号：203234125...