转基因内皮细胞的构建及其在复合血管上种植的初步研究

作     者：顾兴华 贾剑国 汪洋 毛红霞 宿燕岗 左伋 孙爱军 张红旗 徐丹令 邹云增 王克强 葛均波 GU Xing-Hua;JIA Jian-Guo;WANG Yang;MAO Hong-Xia;SU Yan-Gang;ZUO Ji;SUN Ai-Jun;ZHANG Hong-Qi;XU Dan-Ling;ZHOU Yun-Zeng;WANG Ke-Qiang;GE Jun-Bo

作者机构：复旦大学附属中山医院 复旦大学上海医学院 Lerner Research InstituteClevelandOhio44195USA 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30270545) 863课题(2002AA326110) 

出 版 物：《中国生物医学工程学报》 (Chinese Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2006年第25卷第2期

页      码：133-141页

摘      要：目的:为了解决小口径(直径7mm以下)人造血管术后通畅率低下的问题,利用生物-人工复合血管,结合分子生物学手段,将转入血管内皮生长因子(VEGF165)基因的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)种植于复合血管内腔面,为解决此临床难题提供新的思路和手段。材料方法:构建VEGF165真核表达质粒pCI-neo-VEGF165,获得正确的质粒用于转染HUVEC。从中科院购买HUVEC(代号:ECV-304),用脂质体介导法将pCI-neo-VEGF165转入细胞,经G418筛选后,计数阳性克隆,以比较脂质体和质粒在不同比例情况下转染效率的高低。实验组按质粒和脂质体比例的不同分为4组:1μg/3μl;2μg/6μl;2μg/8μl;3μg/12μl。ELISA检测瞬时转染后HUVEC培养上清中VEGF的表达。再将VEGF165基因瞬时转入HUVEC,利用自己设计的旋转培养装置,将细胞均匀地粘附、种植于复合血管内腔面。复合血管是人工材料(聚酯)和生物材料(成纤维细胞长入,胶原形成)有机结合而成,是将包有聚酯网的硅胶棒埋入绵羊背部皮下组织,3个月后取出,抽去硅胶棒而得到的。结果:脂质体转染效率以2μg/8μl组阳性克隆数最多;ELISA测定瞬时转染后HUVEC培养上清中VEGF的表达量为532·5±43·1pg/ml。使用旋转培养装置的细胞均匀地粘附于复合血管,未使用者细胞积聚于血管腔面下部;转入和未转入VEGF165基因的HUVEC在复合血管内腔面覆盖面积百分比分别为69·9%±3·5%、43·7%±2·5%,有明显改善。结论:转入VEGF后可促进HUVEC在复合血管上生长,旋转培养装置有利于细胞的均匀粘附。

主 题 词：血管内皮生长因子 人脐静脉内皮细胞 转染 复合血管 

学科分类：08[工学] 080501[080501] 0805[工学-能源动力学] 080502[080502] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.0258-8021.2006.02.002

馆 藏 号：203235229...