利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得AtLCR67基因敲除突变体

作     者：刘询 庞奥运 刘春林 阮颖 Liu Xun;Pang Aoyun;Liu Chunlin;Ruan Ying

作者机构：湖南农业大学生物科学技术学院长沙410128 湖南农业大学农学院长沙410128 

基　　金：国家自然基金面上项目(31571707) 国家重点研发计划项目子课题(2016YFD0100202-8)共同资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2017年第15卷第6期

页      码：2335-2340页

摘      要：拟南芥AtLCR67基因属于低分子量富含半胱氨酸(low-molecular-weight cysteine-rich,LCR)基因家族。在正常生长条件下,该基因在发育的种子中特异表达。为了研究该基因在发育或代谢过程中的可能作用,在没有合适T-DNA插入突变缺乏的情况下,我们利用CRISPR-Cas9定向敲除技术来创制该基因沉默的拟南芥突变体材料。通过构建AtLCR67基因的CRISPR-Cas9敲除质粒,借助农杆菌介导的浸花法转化野生型拟南芥Col-0,最终获得12株T0代转基因植株。对T0转基因植株的AtLCR67基因进行测序分析发现,在设计的靶位点处存在短片段缺失12个碱基和增加一个T碱基两种突变类型,进一步做RT-PCR检测分析发现突变体中AtLCR67基因完全不表达,说明成功获得拟南芥lcr67突变体。突变体材料的获得为进一步研究AtLCR67基因在发育或代谢方面的的功能奠定了良好基础。

主 题 词：拟南芥 AtLCR67 CRISPR-Cas9 基因敲除 遗传转化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13271/j.mpb.015.002335

馆 藏 号：203236950...