猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：王淑娟 刘梅芬 闫若潜 班付国 赵雪丽 马震原 王华俊 王翠 赵明军 WANG Shu-juan;LIU Mei-fen;YAN Ruo-qian;BAN Fu-guo;ZHAO Xue-li;MA Zhen-yuan;WANG Hua-jun;WANG Cui;ZHAO Ming-jun

作者机构：河南省动物疫病预防控制中心郑州450008 

基　　金：河南省科技创新人才计划项目"猪重要疫病快速检测集成技术研究"(174200510003) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2017年第44卷第7期

页      码：2112-2118页

摘      要：为建立一种快速、敏感、特异的猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)实时荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中CSFV E2基因保守区域序列,设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以CSFV总RNA为反转录模板,经优化反应条件,建立CSFV实时荧光定量PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了检测。结果表明,本研究建立的CSFV实时荧光定量PCR检测方法在101~106拷贝/μL范围内有很好的线性关系,相关系数为0.999;CSFV细胞培养物出现阳性扩增信号,但ST正常细胞对照和其他8种病原对照未出现扩增,特异性良好;该方法重复性好、敏感性高,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,并且CSFV的最低检测限为1TCID50/mL;自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品,与本课题组建立的CSFV Nested RT-PCR检测结果和克隆测序结果一致。本研究成功建立了CSFV实时荧光定量PCR检测方法,可用于CSFV的快速检测。

主 题 词：猪瘟病毒 实时荧光定量PCR 特异性 重复性 敏感性 应用 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.07.029

馆 藏 号：203236966...