绵羊Nanog启动子克隆及其表达活性的检测

作     者：郭虎 章栩铖 胡媛绣珠 尚美奇 安铁洙 王春生 GUO Hu ZHANG Xu-cheng HUYUN Xiu-zhu SHANG Mei qi AN Tie zhu WANG Chun-sheng

作者机构：东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 

基　　金：东北林业大学大学生科研训练项目 东北林业大学生命科学学院大学生创新资助项目 国家自然科学基金资助项目(31000990) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2017年第37卷第7期

页      码：1316-1321页

摘      要：通过比对人、鼠、兔和牛的Nanog启动子保守区设计引物,PCR扩增绵羊Nanog基因启动子序列并分析其调控位点。将其连接到去掉自身CMV启动子的pAcGFP1-N1载体上,构建一个由Nanog启动子带动的真核表达载体(SNanog-pAcGFP1-N1),即构建一个能由该启动子序列带动并产生绿色荧光蛋白(GFP)的真核表达载体,并用脂质体法转染入终末分化细胞(小鼠成纤维细胞和绵羊成纤维细胞)、胚胎干细胞和小鼠胚胎,检测其表达活性。结果显示:成功克隆出1 836bp Nanog启动子序列,通过分析发现该序列含有SP1结合位点、CAAT框、TATA框等功能区;当转染SNanog-pAcGFP1-N1重组质粒后,小鼠胚胎和小鼠胚胎干细胞中能检测到绿色荧光,且在转染72h后达到最大荧光强度,而在小鼠成纤维细胞和绵羊成纤维细胞中不能观察到GFP。结果表明:本试验成功克隆获得绵羊Nanog启动子,所构建的真核表达载体具有在多能干细胞中特异性表达活性。

主 题 词：绵羊 Nanog启动子 载体构建 表达活性分析 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2017.07.19

馆 藏 号：203237100...