针对K-ras基因点突变的反义寡核苷酸对人胰腺癌Patu 8988细胞的抑制作用

作     者：申咏梅 杨晓春 张梅花 石怡珍 孙亦晖 沈钧康 

作者机构：苏州大学附属第二医院放免中心215004 苏州大学附属第二医院磁共振室215004 苏州大学附属第二医院普外科215004 

基　　金：苏州市社会发展基金(SZD0614) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2007年第24卷第12期

页      码：1533-1536页

摘      要：目的检测人胰腺癌 Patu 8988细胞 K-ras 基因点突变形式,并观察针对该点突变的硫代反义寡核苷酸在体内外对 Patu 8988细胞增殖和凋亡的影响。方法顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法和基因测序检测 Patu 8988细胞 K-ras 点突变形式,根据点突变形式设计并合成硫代反义寡核苷酸(K-ras mutation ASODN)作用 Patu 8988,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)检测 K-ras 蛋白表达和细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测K-ras mRNA 表达水平;以 Patu 8988细胞建立裸鼠胰腺癌模型观察 K-ras mutation ASODN 在体内的抗肿瘤效果。结果 PCR-SSP 法和基因测序检测表明 Patu 8988细胞存在 K-ras 基因第12密码子点突变,其突变方式为 GGT→GTT。体外实验表明 K-ras mutation ASODN 组较正义寡核苷酸(SODN)组、随机寡核苷酸(RODN)组和空白对照组可明显抑制 Patu 8988细胞生长(P<0.01),并呈时间-剂量效应关系;转染48 h 后,K-ras mutation ASODN 组的 K-ras 蛋白和 mRNA 表达程度较SODN 组、RODN 组和对照组均明显降低(P<0.01),而细胞凋亡明显增多(P<0.05)。体内实验表明 K-ras mutation ASODN 较 SODN 组、RODN 组和对照组能有效抑制 BALB/C 裸鼠人胰腺癌的生长(P<0.01)。结论针对 K-ras 基因第12密码子点突变的反义寡核苷酸可明显抑制人胰腺癌 Patu8988细胞生长,促进细胞凋亡,其机制可能是通过下调 K-ras 蛋白和 K-ras mRNA 表达而起作用。

主 题 词：胰腺癌 反义寡核苷酸 基因突变 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:1001-9030.2007.12.030

馆 藏 号：203240141...