嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氰酸酶的表达、纯化及其性质鉴定

作     者：戴云杰 郑春丽 谭建锡 金德才 吴安娜 柳建设 DAI Yun-jie;ZHENG Chun-li;TAN Jian-xi;JIN De-cai;WU An-na;LIU Jian-she

作者机构：中南大学资源加工与生物工程学院湖南长沙410083 东华大学环境科学与工程学院上海201620 

基　　金：国家"973"基金资助项目(2004CB619204) 国家自然科学创新群体基金资助项目(50621063) 全国博士学位论文作者专项资金资助项目(200549) 国家自然科学基金项目(50874032) 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2009年第9卷第11期

页      码：2005-2007,2004页

摘      要：目的:嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)硫氰酸酶是硫代谢中极其重要的酶,其作用主要包括氰化物的解毒,铁-硫蛋白的合成,以及硫胺、硫尿苷或烟碱乙酸胆碱的生物合成,硫氰酸酶的研究对揭示生物冶金机理具有重要的推动作用。方法:以*** ATCC23270基因组为模板设计引物,通过PCR扩增得到编码硫氰酸酶的基因,目的基因片段与原核表达载体PLM1构建重组体,然后转入大肠杆菌(Escherichia coli,***)DH5a感受态中,基因测序正确后,重组质粒再转入***21感受态中,加IPTG诱导蛋白表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的硫氰酸酶。结果:SDS-PAGE分析证实蛋白分子量为21kD,紫外可见光分析,确定硫氰酸酶中含有铁硫簇,酶活测定发现重组硫氰酸酶在体外不具有酶活性,可能与酶反应条件及信号肽的切断有关。结论:体外成功克隆,表达,纯化出重组体硫氰酸酶,其基本性质也得到阐述。

主 题 词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌 硫氰酸酶 铁硫簇 表达 纯化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 071005[071005] 10[医学] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2009.11.008

馆 藏 号：203240747...