靶向胰腺癌PANC-1细胞整合素连接激酶基因RNA干扰质粒的构建及鉴定

作     者：刘宁 刘伟 马刚 郭克建 宋少伟 

作者机构：中国医科大学附属第一院普通外科胰腺外科辽宁省沈阳市110001 

基　　金：辽宁省教育厅基金资助项目 No.2009A783 辽宁省科技厅基金资助项目 No.2011225019 沈阳市科技厅基金资助项目 No.F11-264-1-09~~ 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2012年第20卷第5期

页      码：374-379页

摘      要：目的:构建整合素连接激酶(integrin-linkedkinase,ILK)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组质粒并检测其对胰腺癌PANC-1细胞ILK基因表达的干扰效率,为进一步研究胰腺癌中ILK基因功能奠定实验基础和理论依据.方法:设计并构建3条含有针对ILK基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的重组质粒并进行DNA测序.通过阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒转入人胰腺癌细胞株Panc-1细胞中,G418压力筛选至得到稳定转染细胞克隆,利用Real-Time PCR和Western blot检测ILK基因的表达抑制情况.筛选出干扰效率最高的重组质粒.结果:经DNA测序证实胰腺癌PANC-1细胞ILK基因的R NA干扰重组质粒构建成功;重组质粒稳定转染Panc-1细胞后(各组转染效率均>90%),各实验组ILK基因表达均被有效地抑制,其中重组质粒-2的干扰效率最高,其mRNA及ILK表达显著下调,其抑制率分别为93.01%和65.69%;ILK mRNA表达较阴性对照组、空质粒组表达量显著下降(0.090±0.009vs 1.147±0.110,1.005±0.121,P<0.01).结论:成功构建ILK基因RNA干扰重组质粒,重组质粒能有效抑制胰腺癌Panc-1细胞ILK基因表达.为进一步研究ILK在胰腺癌中的基因功能奠定基础.

主 题 词：胰腺癌 整合素连接激酶 RNA干扰 基因治疗 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203242026...