RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用

作     者：鞠斌 王卫 丛喆 姚南 陈霆 杜文达 苏爱华 高锡强 魏强 JU Bin;WANG Wei;CONG Zhe;YAO Nan;CHEN Ting;DU Wen-da;SU Ai-hua;GAO Xi-qiang;WEI Qiang

作者机构：中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021 

基　　金：国家科技重大专项课题(2012ZX10001-007-008和2012ZX10004-501) 

出 版 物：《中国比较医学杂志》 (Chinese Journal of Comparative Medicine)

年 卷 期：2012年第22卷第10期

页      码：37-42页

摘      要：目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温度和PCR反应最佳循环数等条件,建立rt基因PCR扩增方法;在此基础上将模板进行有限稀释,摸索rt基因单拷贝PCR扩增条件;使用该方法扩增感染猴体内RT-SHIV病毒rt基因,BioEdit软件进行基因序列分析。结果筛选得到一组巢式PCR引物,成功建立了RT-SHIV rt基因PCR扩增方法;当模板浓度为100 copies/μL时,扩增产物为单拷贝序列;测序结果显示RT-SHIV感染猴d266和d294血浆样本分别存在1处和6处氨基酸突变。结论本研究建立的全长rt基因单拷贝PCR扩增方法特异性好、灵敏度高、重复性强,可以应用于各类RT-SHIV病毒的全长rt基因分析。

主 题 词：RT-SHIV 单拷贝PCR rt基因 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7856.2012.010.009

馆 藏 号：203242295...