山羊痘病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作     者：姚俊 段国军 陈官国 彭海生 鲁富有 杨永军 李华春 YAO Jun;DUAN Guo-jun;CHEN Guan-guo;PENG Hai-sheng;LU Fu-you;YANG Yong-jun;LI Hua-chun

作者机构：云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省丽江市华坪县畜牧兽医站云南华坪674800 云南省普洱市动物疫病预防控制中心云南普洱665000 

基　　金：云南省科技厅农业科技创新工程(2008LA019) 

出 版 物：《山地农业生物学报》 (Journal of Mountain Agriculture and Biology)

年 卷 期：2012年第31卷第5期

页      码：412-419页

摘      要：根据GenBank中山羊痘病毒(AY077835)gp063基因DNA序列,应用Beacon Designer 7.0软件,设计合成1对引物和1条TaqMan探针,同时制备含有靶DNA序列的pEASY-T1重组质粒标准品。通过引物、探针浓度的筛选及反应条件的优化,建立了山羊痘病毒TaqMan法实时荧光定量PCR。该方法组内和组间重复试验变异系数均低于2%,最低浓度检测极限值为1×100copies/μL,上机检测时间少于40 min。运用该方法对不同时期流行于云南局部的山羊痘临床组织病料进行定量检测,生成的标准曲线斜率(Slope)为-3.36,截距(Intercept)为41.08,相关系数(R2)为0.999 989,阳性对照及送检样品抽提DNA中病毒含量依次为:P(TK)2.70×105copies/μL,华坪(HP)毒株1.45×106copies/μL,景谷(JG)毒株5.12×105copies/μL,保山(BS)毒株2.96×105copies/μL,宣威(XW)毒株1.86×105copies/μL,永胜(YS)毒株1.36×103copies/μL。结果表明:所建立方法具有灵敏、特异、安全、快速的特点,适合于山羊痘的早期检测。

主 题 词：山羊痘病毒 TaqMan 实时荧光定量PCR 

学科分类：090603[090603] 0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0457.2012.05.009

馆 藏 号：203242296...