圆红冬孢酵母磷酸盐饥饿诱导表达载体的构建

作     者：马斯佳 王雅南 焦翔 张素芳 赵宗保 Sijia Ma;Yanan Wang;Xiang Jiao;Sufang Zhang;Zongbao K.Zhao

作者机构：大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034 中国科学院大连化学物理研究所生物技术部辽宁大连116023 大连洁净能源国家实验室(筹)生物能源研究部辽宁大连116023 

基　　金：国家自然科学基金(31370128 31170060) 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2015年第55卷第11期

页      码：1505-1511页

摘      要：【目的】建立一种适用于圆红冬孢酵母代谢工程的磷酸盐饥饿诱导表达系统。【方法】对圆红冬孢酵母pho89基因5 侧翼序列进行生物信息学分析,设计相应引物,PCR扩增pho89基因启动子(p PHO89)和hsp70基因终止子(t HSP),利用RF克隆方法置换出发载体上的p PGK组成型启动子和t NOS终止子,以潮霉素磷酸转移酶基因hyg为报告基因,得到响应磷酸盐饥饿诱导的单表达盒载体p ZPK-p PHO89-hyg-t HSP,利用ATMT方法转化圆红冬孢酵母,通过转化子潮霉素抗性表型鉴定p PHO89和t HSP的启动子和终止子活性。在此基础上,构建了适合外源基因表达的双表达盒诱导表达载体p ZPK-HYG-p PHO89-MCS-t HSP,并利用该载体构建了苹果酸酶重组表达菌株。【结果】成功构建了响应磷酸盐饥饿的圆红冬孢酵母诱导性表达载体,该载体在圆红冬孢酵母中可表现出启动子和终止子活性。【结论】该启动子受磷酸盐浓度的严谨调节,响应度高,操作简单,无需额外诱导剂,经济便捷,为后续圆红冬孢酵母代谢工程研究提供了基本材料。

主 题 词：圆红冬孢酵母 磷酸盐饥饿 pPHO89启动子 终止子 表达载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 071005[071005] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13343/j.cnki.wsxb.20150075

馆 藏 号：203243677...