灯盏花CHI基因的再克隆及其绿色荧光蛋白表达载体构建

作     者：木佳 应宇翔 张云峰 何凤明 卢开阳 官会林 严胜柒 MU Jia;YING Yu-xiang;ZHANG Yun-feng;HE Feng-ming;LU Kai-yang;GUAN Hui-lin;YAN Sheng-qi

作者机构：云南师范大学生命科学学院云南昆明650500 生物能源持续开发利用教育部工程研究中心云南昆明650500 云南师范大学能源与环境学院云南昆明650500 云南师范大学-台湾新竹清华遗传-环境互作联合实验室云南昆明650500 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30660075 31360263) 云南省科技厅社会发展科技计划基础研究面上资助项目(2009CD052) 云南省应用基础研究计划资助项目(2011FA016) 

出 版 物：《云南师范大学学报（自然科学版）》 (Journal of Yunnan Normal University:Natural Sciences Edition)

年 卷 期：2016年第36卷第3期

页      码：53-60页

摘      要：根据灯盏花转录组所注释的CHI unigene片段,设计了RACE相关引物,克隆到灯盏花CHI的cDNA全长序列,序列全长717bp,编码238个氨基酸.该氨基酸序列与我们前期所克隆的灯盏花CHI cDNA序列相比,在345、351位点发生了突变,碱基均由C突变为T,两个位点的突变均属于同义突变,编码的氨基酸分别为115、117位异亮氨酸、酪氨酸.同时将CHI基因片段插入到pDM 18-T,构建pDM 18-T-eBCHI中间载体.经测序验证后,根据pBI121-EGFP图谱,设计带有SalI、SpeI酶切位点的引物,以pDM 18-T-eBCHI中间载体为模板,扩增带酶切位点的CHI序列,扩增产物经回收、纯化后与双酶切的pBI121-EGFP链接,构建了重组表达载体pBI121-EGFP-CHI,CHI基因插入植物表达载体pBI121-EGFP的6xHis组氨酸标签与GFP基因间.经SalI、SpeI双酶切和PCR验证重组质粒,均能得到约750bp的目的片段,通过进一步测序证明,CHI基因已成功地连接到pBI121-EGFP-eBCHI中.采用电击转化法将重组质粒导入根癌农杆菌GV3101,用叶盘法转化灯盏花叶片,筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,经PCR扩增和叶绿素荧光成像检测证明,重组基因已成功地转化到灯盏花愈伤组织中.为利用转基因技术研究CHI基因的表达及其亚细胞定位打下基础.

主 题 词：灯盏花 查尔酮异构酶 绿色荧光蛋白 表达载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.7699/j.ynnu.ns-2016-040

馆 藏 号：203243905...