荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品质粒及标准曲线的构建

作     者：江小工 徐兵 许文娟 李冰 

作者机构：第一军医大学南方医院血液科广州市510515 

出 版 物：《实用医学杂志》 (The Journal of Practical Medicine)

年 卷 期：2004年第20卷第2期

页      码：115-117页

摘      要：目的 :构建荧光定量PCR检测TCRVγI Jγ基因标准品重组质粒和标准曲线 ,为建立实时荧光定量PCR准确检测淋巴系肿瘤微小残留病奠定基础。方法 :对TCRVγI Jγ基因进行序列分析 ,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针。提取急性淋巴细胞白血病患者的DNA ,经PCR扩增 ,产物纯化后与pMD 18 TVector连接 ,转化到大肠杆菌DH5α ,筛选得到标准品的质粒。结果 :重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长 ,表明TCRVγI Jγ基因已成功克隆。以 10 0 ～ 10 -5不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增 ,Ct值分别为 2 1 0 8、2 4 3 4、2 7 5 3、3 0 5 8和 3 3 2 5。统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系 ,回归系数为 0 998。结论 :所构建的TCRVγI Jγ基因荧光定量PCR检测标准品特异性和线性关系好 ,准确可靠 。

主 题 词：荧光定量 PCR检测 TCRVγI-Jγ 基因重排 标准品质粒 标准曲线 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-5725.2004.02.005

馆 藏 号：203249588...