利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统构建HeLa细胞SND1基因敲除稳定株

作     者：刘郁莹 崔晓腾 高星杰 赵秀娟 付雪 葛林 苏超 杨洁 LIU Yu-ying;CUI Xiao-teng;GAO Xing-jie;ZHAO Xiu-juan;FU Xue;GE Lin;SU Chao;YANG Jie

作者机构：天津医科大学生物化学系天津300070 天津医科大学基础医学研究中心天津300070 天津医科大学细胞生物学系天津300070 天津医科大学生物化学系，天津 300070 天津医科大学基础医学研究中心，天津 300070 

出 版 物：《天津医科大学学报》 (Journal of Tianjin Medical University)

年 卷 期：2015年第21卷第6期

页      码：480-483页

摘      要：目的：利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除HeLa细胞中SND1基因，构建HeLa细胞SND1基因敲除稳定株。方法：设计一对特异性识别SND1基因第二个启动子的上下游sgRNA，以PX462质粒为载体，构建出一对重组真核表达质粒。酶切和测序鉴定后，将一对重组质粒共同转染进入HeLa细胞中，使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选，挑取单克隆细胞进行培养。最后用Western Blot鉴定敲除效果。结果：sgRNA正确插入到PX462质粒载体中，转染并筛选单克隆后的细胞中没有SND1蛋白的表达。结论：成功构建出HeLa细胞SND1基因敲除稳定株。

主 题 词：SND1 基因敲除 CRISPR/Cas9 HeLa细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

馆 藏 号：203249637...