PRRSV细胞受体CD163 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立

作     者：马小元 丁耀忠 王俊 张杰 张永光 MA Xiaoyuan;DING Yaozhong;WANG Jun;ZHANG Jie;ZHANG Yongguang

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046 

基　　金：国家国际合作项目(2012DFG31890) 国家自然科学基金项目(31072143) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 (Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine)

年 卷 期：2017年第7期

页      码：108-110,295,296页

摘      要：为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)细胞受体CD163在宿主感染PRRSV过程中的表达情况,根据CD163的序列在其保守区设计了1对特异性引物,基于SYBR GreenⅠ荧光染料建立了一步法检测CD163的实时荧光定量RT-PCR(real time RT-PCR)法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验及样品检测试验。结果表明:建立的方法具有较高的特异性,PRRSV的其他几个受体(CD151、HS)均为阴性反应;对CD163的检测下线为10个拷贝数的模板RNA,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对样品进行3次组内和组间重复试验,变异系数(CV)<2%,具有较好的重复性和稳定性;利用该方法对PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间段CD163的转录水平进行检测,结果显示CD163在48小时时的mRNA含量明显高于其他各时间段。说明所建立的针对CD163的检测方法完全可以应用于临床样品的检测。

主 题 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) CD163 SYBR GreenⅠ 荧光定量RT-PCR Marc-145细胞 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.20170510.001

馆 藏 号：203254434...