突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达

作     者：左爱军 梁东春 刘新宇 郭刚 张镜宇 ZUO Aijun;LIANG Dongchun;LIU Xinyu;GUO Gang;ZHANG Jingyu

作者机构：天津市内分泌研究所300070 

出 版 物：《天津医药》 (Tianjin Medical Journal)

年 卷 期：2005年第33卷第11期

页      码：719-721页

摘      要：目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础。方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(C125)的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2熏温度诱导表达,表达产物行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及WesternBlot鉴定。结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16.5ku的外源蛋白产生,经Western印迹(WesternBlot)证明为rhIL-2。结论:成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统,表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。

主 题 词：突变 白细胞介素2 大肠杆菌 基因表达 白细胞介素-2基因 大肠杆菌表达系统 突变型 WesternBlot SDS-PAGE 人白细胞介素-2 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0253-9896.2005.11.015

馆 藏 号：203254829...