甘蔗花叶病毒第Ⅳ组分离物RT-PCR检测体系的建立及应用

作     者：闫志勇 程德杰 房乐 许小洁 田延平 贾曦 李向东 YAN Zhi-yong CHENG De-jie FANG Le XU Xiao-jie TIAN Yan-ping JIA Xi LI Xiang-dong

作者机构：山东农业大学植物保护学院植物病毒学研究室泰安271018 山东省农业科学院济南250100 山东省农业微生物重点实验室泰安271018 

基　　金：山东省现代农业产业技术体系(SDAIT-02-10) 山东省农业重大应用创新项目 

出 版 物：《植物病理学报》 (Acta Phytopathologica Sinica)

年 卷 期：2017年第47卷第4期

页      码：463-469页

摘      要：甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮化叶病的主要病毒。根据其基因组序列,SCMV可以分为4个组,其中第Ⅳ组分离物属于新出现的强毒株系。为了快速检测SCMV尤其是Ⅳ组分离物的发生情况,我们针对SCMV Ⅰ-Ⅳ组及Ⅳ组分离物设计了6对引物,从中筛选出特异性最强的2对引物(Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R),进行PCR体系的优化。优化后的PCR体系为:退火温度51℃,d NTP终浓度为0.1 mM,引物终浓度为0.20μM,Taq DNA聚合酶终浓度为0.015 U·μL^(-1)。利用该体系,引物对Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R均能够从50 ng感病叶片或0.05 ng病毒RNA中检测出SCMV。通过优化两对引物浓度比例建立了能同时检测SCMV所有分离物及第四组分离物的双重PCR体系。利用该体系从山东、河南及云南均检测出SCMV第Ⅳ组分离物的发生。本研究为SCMV尤其是SCMV第Ⅳ组分离物的快速检测提供了技术支持。

主 题 词：甘蔗花叶病毒 第Ⅳ组 检测 反转录-聚合酶链式反应 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

核心收录：

D　O　I：10.13926/j.cnki.apps.000061

馆 藏 号：203255352...