焦磷酸测序快速检测3种海洋性弧菌的方法学建立及创伤弧菌16S rRNA基因分型的研究

作     者：张丽娜 郑妍 胡成进 周月霞 陈英剑 ZHANG Li-na ZHENG Yan HU Cheng-jin ZHOU Yue-xia CHEN Yirtg-jian

作者机构：济南军区总医院实验诊断科济南250031 青岛慧康医院检验科山东青岛266520 

基　　金：全军"十二五"科研重点项目(BWS12J014) 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2017年第35卷第7期

页      码：481-485页

摘      要：目的建立一种海洋致病性弧菌的快速诊断方法,为海洋性弧菌感染的临床检测构建新的技术平台。方法分别针对创伤弧菌vvh A,副溶血弧菌和溶藻弧菌的toxR基因设计扩增引物和测序引物,并PCR扩增特异性DNA片段,制备单链模板,进行焦磷酸测序,得到的碱基序列经NCBI比对验证;对创伤弧菌16S rRNA基因进行分型。结果创伤弧菌的扩增引物和测序引物均表现出较好的特异性,4株创伤弧菌均扩增出167 bp大小的DNA片段,并且测序结果与NCBI比对达到100%匹配度,而其他菌株未见扩增条带,测序结果为阴性;11株副溶血弧菌和溶藻弧菌均分别扩增出105 bp和134 bp大小的DNA片段,并且经测序得到与预期相符的DNA碱基序列。4株创伤弧菌中1株属于16S rRNA-A型,其余3株均属于16S rRNA-B型。结论本研究建立的PCR-焦磷酸测序方法是一种短核苷酸序列实时测定的新方法,具有高通量、精确、简单易行的优点,适用于海洋性致病菌及陆地感染细菌的快速精准鉴定。

主 题 词：海洋性弧菌 焦磷酸测序 快速诊断 聚合酶链式反应 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.13602/j.cnki.jcls.2017.07.01

馆 藏 号：203255379...