猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌二重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：李富祥 朱凤琼 吴晶 宋建领 杨仕标 赵文华 邵庆勇 李华春 LI Fu-xiang;ZHU Feng-qiong;WU Jing;SONG Jian-ling;YANG Shi-biao;ZHAO Wen-hua;SHAO Qing-yong;LI Hua-chun

作者机构：云南省畜牧兽医科学院云南昆明650224 云南省陆良县动物疾病预防控制中心云南陆良655600 

基　　金：云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目(云财教160号) 云南省现代农业奶牛产业技术体系建设(云财农171号) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2017年第47卷第8期

页      码：1027-1031页

摘      要：为建立一种快速、准确检测猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌二重TaqMan荧光定量PCR方法,本研究根据猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌16S rRNA基因保守序列设计种特异性引物及探针,并优化反应条件,建立了检测猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌的二重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,所建方法特异性良好,与其他25种常见细菌均无交叉反应。猪丹毒杆菌检测在2.07×108~2.07×103copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可以检测到2.07×102copies/L的标准品阳性质粒,批内和批间变异系数均小于3%;溶血性曼氏杆菌检测在1.07×108~1.07×103copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可以检测到1.07×102copies/L的标准品阳性质粒,批内和批间变异系数均小于3%。应用建立的二重荧光定量方法和普通荧光定量方法对47份临床样品进行检测,符合率为100%。本研究结果表明,所建立的方法可用于猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌感染的高通量快速诊断以及猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌的快速鉴定及定量分析。

主 题 词：猪丹毒杆菌 溶血性曼氏杆菌 TaqMan荧光定量PCR 诊断 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.08.016

馆 藏 号：203255452...