转化生长因子-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA真核表达质粒的构建及鉴定

作     者：周昌宁 曹海宁 陈浩 张彩萍 吕会增 郑宗珩 陈图峰 王晖 ZHOU Chang-ning;CAO Hai-ning;CHEN Hao;ZHANG Cai-ping;LV Hui-zeng;ZHENG Zong-heng;CHEN Tu-feng;WANG Hui

作者机构：中南大学附属第三医院长沙市410013 中南大学口腔医学院长沙市410008 中山大学附属第三医院胃肠外科广州市510630 

出 版 物：《实用医学杂志》 (The Journal of Practical Medicine)

年 卷 期：2008年第24卷第11期

页      码：1874-1876页

摘      要：目的:针对转化生长因子-!(TGF-β)Ⅱ型受体基因的不同部位,构建不同TGF-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA(shRNA)表达质粒载体,在转录后水平抑制TGF-βⅡ型受体的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法:用DNA重组技术将针对人TGF-βⅡ型受体基因不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒pSilencerTM3.1-H1neovector中,构建TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3、4。脂质体介导转染成人原代成纤维细胞,经G418筛选抑制TGF-βⅡ型受体表达的稳定细胞克隆。结果:3个TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westernblotting均证实3种shRNA重组质粒中pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA2可明显降低细胞内TGF-βⅡ型受体mRNA峰度及TGF-βⅡ型受体蛋白表达。结论:成功构建了TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3,并筛选出特异而高效的阻断TGF-βⅡ型受体表达的克隆。此实验结果为进一步研究TGF-βⅡ型受体蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。

主 题 词：瘢痕 shRNA TGF-βⅡ型受体 转化生长因子 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-5725.2008.11.008

馆 藏 号：203255613...