增殖细胞核抗原突变体的稳定高表达对HeLa细胞顺铂敏感性的影响

作     者：位全芳 曾益军 杨劲 周虎传 刘洋 徐志刚 袁方 赵友光 WEI Quanfang;ZENG Yijun;YANG Jin;ZHOU Huchuan;LIU Yang;XU Zhigang;YUAN Fang;ZHAO Youguang

作者机构：第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆市400038 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆市400038 

基　　金：国家自然科学基金(No.30770460) 全军医学科研"十一五"计划国际合作项目(No.06H026)~~ 

出 版 物：《医学分子生物学杂志》 (Journal of Medical Molecular Biology)

年 卷 期：2008年第5卷第6期

页      码：498-502页

摘      要：目的建立稳定高表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)或突变体PC-NA(mutant PCNA,mPCNA)目的蛋白的宫颈癌细胞系HeLa细胞,观察PCNA在顺铂诱导的DNA损伤修复中的作用。方法采用显性负突变策略,通过构建重组人PCNA或mPCNA的真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-PCNA(His-PCNA)和pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA(His-mPCNA),稳定转染到HeLa细胞中,G418筛选建立稳定高表达目的蛋白的HeLa细胞系;Western印迹法检测蛋白的表达情况;MTT法测定顺铂损伤后不同细胞系的细胞存活率。结果真核表达质粒经酶切、测序分析与实验设计完全一致;稳定建系后,Western印迹结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;MTT结果显示稳定高表达突变体PCNA的细胞系与对照组相比,其细胞存活率呈明显下降趋势。结论成功构建了真核表达质粒His-PCNA和His-mPC-NA;建立了稳定高表达该质粒的HeLa细胞系;稳定高表达突变体PCNA的细胞系对顺铂损伤更敏感。

主 题 词：增殖细胞核抗原 稳定转染 HeLa细胞 顺铂 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3870/j.issn.1672-8009.2008.06.007

馆 藏 号：203255753...