RNA干扰联合Cre-loxP系统建立小鼠巨噬细胞RAW264.7 GR表达抑制模型

作     者：李晓清 杨国汉 李秀英 钟瑜 陈林 徐晓玉 

作者机构：第三军医大学附属大坪医院及野战外科研究所中医科重庆400042 重庆医科大学药学院药理教研室重庆400016 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:30472119) 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2010年第35卷第8期

页      码：1217-1220页

摘      要：目的:应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)及Cre-loxP系统构建针对目的基因糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)表达抑制细胞模型。方法:设计并合成两对RNAi靶序列,连接至pBS/U6-Neo载体,联合应用Cre-loxP系统及RNAi构建针对目的基因GR的两对重组质粒,对构建的重组质粒采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)及测序的方法进行鉴定,将构建成功的重组质粒及Cre-ERT2质粒稳定共转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用半定量逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot的方法分别检测诱导RNAi表达后GR在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果:构建的两个针对目的基因GR的重组质粒可显著降低GR在mRNA及蛋白水平的表达。结论:联合采用RNAi及Cre-loxP系统能可控的稳定降低小鼠巨噬细胞RAW264.7中的GR表达。

主 题 词：糖皮质激素受体(GR) RNA干扰 Cre-loxP系统 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

D　O　I：10.13406/j.cnki.cyxb.2010.08.005

馆 藏 号：203256571...