靶基因Bi-1RNAi重组慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：李祥勇 张美红 林观平 周克元 LI Xiang-yong;ZHANG Mei-hong;LIN Guan-pin;ZHOU Ke-yuan

作者机构：广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023 

基　　金：广东省科技计划项目(83039) 湛江市科技攻关项目(2009C3101012) 

出 版 物：《广东医学院学报》 (Journal of Guangdong Medical College)

年 卷 期：2010年第28卷第5期

页      码：489-492页

摘      要：目的构建靶向人Bax Inhibitor-1(Bi-1)基因的shRNA慢病毒重组载体。方法借助siRNA设计工具,并结合文献资料选取Bi-1基因编码序列中有效的干扰靶点,根据连接载体中的酶切位点自行设计并人工合成干扰靶点的一对反义脱氧寡核苷酸链,先定向克隆到pU6载体(pU6-Bi-1-shRNA),再经双酶切后克隆到慢病毒包装质粒LunIG,得到靶向Bi-1基因沉默的慢病毒包装重组质粒LunIG-Bi-1。重组质粒经PCR法进行初筛后,再通过双酶切电泳和目的基因沉默效果的检测保证插入序列的正确性。结果靶向沉默Bi-1基因的shRNA序列成功插入到慢病毒包装质粒LunIG中。结论靶向Bi-1基因沉默的慢病毒shRNA包装重组质粒构建成功。

主 题 词：Bi-1 基因沉默 RNAi 慢病毒载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-4057.2010.05.001

馆 藏 号：203256677...