棉花miRNA表达量检测方法Stem-loop RT-PCR的建立

作     者：胡广 王乐 张振楠 唐叶 周璐璐 彭清忠 吴家和 HU Guang;WANG Le;ZHANG Zhennan;TANG Ye;ZHOU Lulu;PENG Qingzhong;WU Jiahe

作者机构：吉首大学生物资源与环境科学学院湖南吉首416000 中国科学院微生物研究所/植物基因组学国家重点实验室北京100101 

基　　金：国家自然科学基金(31471544 31460066) 

出 版 物：《核农学报》 (Journal of Nuclear Agricultural Sciences)

年 卷 期：2017年第31卷第11期

页      码：2121-2127页

摘      要：为建立一套鉴定棉花miRNA表达丰度的分子技术,优化了Stem-loop RT-PCR方法,并通过分析棉花3个miRNA的表达谱来评价分析该技术体系的特性。首先设计3条引物(茎环特异性反转录引物、正向引物和通用反向引物),通过cDNA和RNA梯度稀释,分析引物的扩增效率和检测灵敏度。结果表明,Stem-loop RT-PCR方法中设计的引物具有较高的扩增效率和检测灵敏度,miR156和miR159扩增效率分别为102.0%和103.6%;并对不同miRNA分析其总RNA检测灵敏度,miR156和miR159的总RNA检测灵敏度差异较大,分别为20 ng和2 pg。同时,应用建立的棉花Stem-loop RT-PCR方法,成功地分析了Gh-miR156、Gh-miR159和Gh-miR5658在根茎叶中的表达量。由此可见,棉花Stem-loop RT-PCR方法具有灵敏度高、特异性强、成本较低和适用于一般实验室等优点,为棉花等植物miRNA相关研究提供了技术保证,加快了miRNA及其调控基因功能的研究步伐。

主 题 词：Stem-loop RT-PCR 棉花 miRNA 茎环引物 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.11869/j.issn.100-8551.2017.11.2121

馆 藏 号：203260389...