EV71 3C蛋白酶表达纯化、活性分析及与抑制剂模拟对接研究

作     者：尧晨光 奚彩丽 朱祥 柳科峰 纪梦莹 刘媛 胡康洪 魏艳红 YAO Chen-guang;XI Cai-li;ZHU Xiang;LIU Ke-feng;JI Meng-ying;LIU Yuan;HU Kang-hong;WEI Yan-hong

作者机构：湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程湖北省协同创新中心湖北武汉430068 

基　　金：国家自然科学基金青年项目(No.31400153) 湖北工业大学博士科研启动项目(No.BSQD2015004) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2017年第12卷第8期

页      码：722-726页

摘      要：目的表达和纯化肠道病毒71型(EV71)3C蛋白酶并通过与抑制剂相互作用预测其活性位点。方法将3C蛋白酶片段克隆至pET-28a原核表达载体,重组质粒导入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,获得3C蛋白酶融合蛋白,经Ni-NTA柱亲和纯化后以荧光多肽为底物检测3C蛋白酶的活性。使用AutoDock模拟3C蛋白酶与芦丁(Rutin)和芦平曲韦(Lupintrivir)对接。结果经酶切、PCR、测序证明pET28a-3C重组质粒构建成功,表达产物分子质量约23×10~3,纯化的3C蛋白酶酶活较好;对接结果表明Rutin和Rupintrivir通过形成氢键网和疏水键与3C蛋白酶底物结合位点结合,结合的活性氨基酸残基有His161、Gly163、Gly164、Phe170。结论成功制备了具有生物学活性的高纯度EV71 3C蛋白酶,建立了预测能力较好的对接模型,为以3C蛋白酶为靶点的药物设计和筛选奠定了基础。

主 题 词：肠道病毒71型(EV71) 3C蛋白酶 蛋白纯化 酶活检测 分子对接 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.170805

馆 藏 号：203260568...