siRNA敲减DNMT1表达对T-cadherin基因甲基化及结肠癌细胞生物学行为的影响

作     者：罗玉政 李铁军 王佾 陈波 阳光 LUO Yu-zheng LI Tie-jun WANG Yi CHEN Bo YANG Guang

作者机构：重庆市第九人民医院普外科重庆400700 重庆市第九人民医院急诊科重庆400700 

基　　金：重庆市卫生局医学科研项目(2012-2-291) 

出 版 物：《中华肿瘤防治杂志》 (Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment)

年 卷 期：2017年第24卷第14期

页      码：981-988,995页

摘      要：目的肿瘤的发生、发展和侵袭转移是影响结肠癌治疗的重要原因,有研究发现DNA甲基化状态在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,抑制T-cadherin表达可增强肿瘤细胞侵袭和迁移能力。本研究探讨siRNA敲减DNA甲基转移酶1(DNA methyl transferase 1,DNMT1)基因表达对结肠癌细胞T-cadherin基因甲基化及细胞生物学行为影响。方法设计针对DNMT1的siRNA1、siRNA2和siRNA3重组质粒,分别转染HT-29、SW620和HCT116细胞系,采用实时荧光定量PCR检测DNMT1表达,以筛选敲减效率最高的DNMT1siRNA和细胞系。用敲减效率最高的DNMT1siRNA转染相应细胞系,采用甲基化特异性PCR检测T-cadherin甲基化水平,采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测T-cadherin表达。用敲减效率最高的DNMT1siRNA转染相应细胞系,采用噻唑蓝比色法、流式细胞术、Transwell和细胞划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,观察敲减DNMT1对细胞生物学行为的影响;同时设置T-cadherin shRNA重组质粒转染组,观察同时敲减DNMT1和T-cadherin对细胞生物学行为的影响。结果 DNMT1siRNA1重组质粒对HT-29细胞系DNMT1的敲减效果最好。DNMT1siRNA1转染HT-29细胞后,DNMT1组T-cadherin基因甲基化水平明显低于空质粒组和空白组,DNMT1组与空质粒组(F=314.182)和空白组(F=283.625)差异有统计学意义,均P0.05。结论 DNMT1siRNA1可有效敲减HT-29细胞DNMT1表达,逆转T-cadherin高甲基化状态并上调其表达。敲减DNMT1可明显抑制HT-29细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力;而同时敲减T-cadherin能够逆转此种现象,说明敲减DNMT1引起的细胞生物学行为改变可能是通过T-cadherin来实现的。

主 题 词：DNA甲基转移酶1 RNA敲减 结肠癌 甲基化 生物学行为 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.16073/j.cnki.cjcpt.2017.14.007

馆 藏 号：203260816...