PERK干扰慢病毒载体的构建及其在人牙髓细胞中的表达

作     者：文扬 朱亚琴 WEN Yang;ZHU Ya-qin

作者机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔综合科、上海市口腔医学重点实验室、上海市口腔医学研究所、国家口腔疾病临床研究中心上海200011 

基　　金：国家自然科学基金(81271134,81300867) 高等学校博士学位点专项科研基金(博导类,20130073110013) 上海高校高峰高原学科建设项目 

出 版 物：《上海口腔医学》 (Shanghai Journal of Stomatology)

年 卷 期：2017年第26卷第4期

页      码：363-367页

摘      要：目的:构建人PERK基因的shRNA慢病毒载体,检测其对人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)PERK基因表达的抑制作用。方法:针对人PERK基因的cDNA序列,设计并合成针对人PERK基因的shRNA表达序列,将其连接到载体hU6-MCS-CMV-EGFP中。测序正确后,将构建的目的载体和包装质粒共转染293T细胞,72 h后收获并浓缩得到重组慢病毒颗粒。筛选最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI),将病毒感染人牙髓细胞,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测PERK基因mRNA和蛋白的表达水平,验证干扰效果。采用SPSS24.0软件包对数据进行统计学分析。结果:成功构建LV-PERK-RNAi慢病毒载体,病毒滴度为3×10~8 TU/mL,最适MOI=30;RT-PCR和Western印迹法检测显示,与空白对照组相比,PERK基因的mRNA和蛋白质表达水平显著下降,在mRNA水平的表达抑制率约为63%。结论:成功构建PERK干扰慢病毒表达载体,为后续的研究创造了条件。

主 题 词：PERK RNAi 慢病毒载体 

学科分类：1003[医学-口腔医学类] 100302[100302] 10[医学] 

D　O　I：10.19439/j.sjos.2017.04.003

馆 藏 号：203260889...