牛结节性皮肤病病毒TaqMan-MGB荧光PCR检测方法的建立

作     者：聂福平 王昱 黄秋华 杨俊 韩雪清 唐昌杰 袁曾壮 王国民 候长军 李应国 NIE Fu-ping;WANG Yu;HUANG Qiu-hua;YANG Jun;HAN Xue-qing;TANG Chang-jie;YUAN Zeng-zhuang;WANG Guo-min;HOU Chang-jun;LI Ying-guo

作者机构：重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心/国家牛病重点实验室/重庆市进境陆生动物疫病防控研究工程中心重庆400020 重庆大学生物工程学院重庆400030 西南大学荣昌校区重庆4002460 中国检验检疫科学研究院北京100176 

基　　金：国家质检公益性项目(201310093) 重庆市应用开发项目(CSTC2015yykf C8001) 国家十三五科研项目(2016YFD0500907-X) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2017年第47卷第9期

页      码：1129-1134页

摘      要：为建立快速、特异鉴别检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的方法,本研究参照GenBank中发表的LSDV全基因组序列,设计并合成一对特异性引物和探针,经优化条件,建立了可鉴别LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可特异性检测LSDV,而与山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛痘病毒和猪痘病毒均无交叉反应;标准曲线在各浓度范围内呈现良好的线性关系,该方法建立的标准曲线方程为y=-3.141x+32.10,线性相关系数为0.999,扩增效率达到108%,最低检出下限为1.48 copies/L;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%。采用此方法对52份模拟临床样品和112份临床样本的检测结果显示:32份模拟阳性样品检出LSDV核酸阳性,20份模拟阴性样品未检出LSDV;而用OIE推荐的普通PCR方法仅检出28份模拟阳性样品的LSDV核酸阳性,24份模拟样品的LSDV核酸阴性(其中20份为模拟阴性样品,4份为模拟阳性样品);两种方法均未从112份临床样品中检出LSDV核酸阳性。上述结果表明,荧光PCR的敏感性明显优于普通PCR,能够快速准确地检测LSDV,适用于临床样品的检测,为外来疫病防控提供了技术支撑。

主 题 词：牛结节性皮肤病病毒 荧光定量PCR TaqMan-MGB探针 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.09.010

馆 藏 号：203262062...