抗TSLP全人源单链抗体的体外亲和力成熟

作     者：先德群 年四季 叶迎春 徐文峰 袁青 XIAN De-Qun;NIAN Si-Ji;YE Ying-Chun;XU Wen-Feng;YUAN Qing

作者机构：西南医科大学基础医学院泸州646000 西南医科大学药学院药理学教研室泸州646000 

基　　金：四川省科技厅项目(2015JY0218 LY-96) 四川省教育厅项目(16TD0022 17ZB0487) 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2017年第33卷第9期

页      码：1301-1305页

摘      要：目的:对抗TSLP-scFv全人源单链抗体进行单点突变,以提高其亲和力。方法:本研究前期筛选了特异性好的抗TSLP-scFv,本研究利用Discovery Studio系统模拟TSLP和抗TSLP-scFv三维结构,进行分子对接,对结合表位氨基酸进行随机突变,选取可显著提高其亲和力的氨基酸突变点,根据突变位点设计引物,采用重叠延伸PCR对氨基酸位点进行突变。将突变后的scFv基因与表达载体pLZ16连接,转化*** DH5αF ,表达后筛选亲和力提高的抗TSLP-scFv。结果:DS系统筛选出可以提高scFv亲和力的5个单点突变氨基酸位点,PCR扩增出突变后的抗TSLP-scFv DNA片段大小为1000bp左右。将测序正确的菌株进行表达,通过ELISA筛选出与抗原结合力提升的抗TSLP-scFv;通过生物大分子相互作用技术,测定单抗的亲和力,突变后的scFv M4亲和力较突变前提高了10倍左右。结论:成功提升了抗TSLP-scFv全人源单链抗体的亲和力。

主 题 词：抗TSLP-scFv 全人源单链抗体 分子对接 亲和力 

学科分类：1003[医学-口腔医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-484X.2017.09.005

馆 藏 号：203262114...