禽网状内皮组织增生症病毒CA蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

作     者：姜莉莉 王立成 陈强 樊兆斌 JIANG Lili WANG Licheng CHEN Qiang FAN Zhaobin

作者机构：锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121001 菏泽学院药物科学与技术系山东菏泽274015 

基　　金：国家自然科学基金项目(31402170) 辽宁省自然科学基金项目(2014022045) 菏泽学院博士基金(XY16BS09) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2017年第49卷第9期

页      码：67-70页

摘      要：根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)DBYR1102株的前病毒基因组c DNA序列设计并合成1对引物,以p T-G质粒为模板,通过PCR扩增获得该病毒CA基因片段。将其克隆于pET-30a(+)中,构建原核表达质粒pET30a-CA。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。利用Ni-NTA His Bind Resin纯化重组蛋白,并经蔗糖浓缩,Western blot法检测重组蛋白的反应原性。纯化后的目的蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗CA多克隆抗体并对其进行鉴定。结果表明构建的重组质粒pET-30a-CA在大肠杆菌BL21中呈可溶性高效表达。经Ni柱纯化和蔗糖浓缩后得到纯度较高的融合蛋白,以纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,抗体效价达1∶25 600。该研究为REV的检测及CA基因的深入研究奠定了基础。

主 题 词：禽网状内皮组织增生症病毒 CA 原核表达 抗体 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203262762...