变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段的克隆和在大肠杆菌中的表达

作     者：孙汉堂 吴补领 郭希民 孙叶芳 杨聚才 蒲勤 SUN Han-tang;WU Bu-ling;GUO Xi-min;SUN Ye-fang;YANG Ju-cai;PU Qin

作者机构：第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病科 第四军医大学口腔医学院检验科 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室 

出 版 物：《临床口腔医学杂志》 (Journal of Clinical Stomatology)

年 卷 期：2006年第22卷第9期

页      码：537-539页

摘      要：目的：克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因(Glucan-binding protein C gene,gbpC)编码序列的特异片段,并在大肠杆菌中实现原核表达。方法：根据gbpC序列设计并合成一对寡核苷酸引物,PCR扩增位于gbpC编码序列1342 bp～1794 bp间的一段特异片段,扩增产物经回收、酶切后,定向插入克隆载体puc18中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定。将克隆获得的约0．45 kb的gbpC基因特异片段经EcoRI/SalI双酶切后。定向插入pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1/gbpCE原核融合表达载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,酶切及PCR鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达融合蛋白GST—GbpC^E,SDS—PAGE检测表达产物。结果：测序结果与Sato等报道的序列一致；原核表达后,在SDS—PAGE凝胶上出现一条新生蛋白条带,其相对分子量约43000,与预计大小相符合。结论：成功克隆并表达gbpC特异片段,获得了融合蛋白GST-GbpC^E,为制备GbpC抗体打下了基础。

主 题 词：变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 克隆 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1003-1634.2006.09.010

馆 藏 号：203264289...