东方鲎C因子的分段克隆及表达

作     者：王东宁 刘杰武 陈琳 汪洌 杨冠珍 吴祥甫 张惟杰 WANG Dong-Ning 1, 2, LIU Jie-Wu 2, CHEN Lin $, WANG Lie 2, YANG Guan-Zhen 2, WU Xiang-Fu 2*, ZHANG Wei-Jie 1* ( 1College of Life Science and Technology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai200030, China;2Institute

作者机构：上海交通大学生命科学与技术学院 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 

出 版 物：《生物化学与生物物理学报》 (Acta Biochimica Et Biophysica Sinica)

年 卷 期：2002年第34卷第1期

页      码：77-82页

摘      要：东方鲎C因子 (factorCfromTachypleustridentatus)是鲎血细胞中的一种对内毒素敏感的丝氨酸蛋白酶原 ,它与内毒素特异结合的特性 ,使之具有很大的应用价值。根据报道的C因子序列 ,设计了两对引物 ,以中国福建沿海的东方鲎 (Tachypleustridentatus)为材料抽提其血细胞总RNA ,首次用RT PCR的方法分两段扩增了鲎血中编码C因子蛋白的基因全序列。序列分析表明 ,得到的FC基因与文献报道的来自日本的东方鲎的FC有很高的同源性。将分段克隆得到的两段FC片段经相应酶切后 ,与含T7启动子的质粒 pET 2 8a(+)在一个体系中作连接反应 ,构建表达质粒pET2 8a FC ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,筛选表达菌株。表达菌株经 1mmol/LIPTG诱导表达 2 .5h后 ,收集菌体并超声破菌。经SDS PAGE分析表明 ,在 110kD左右处有明显的表达条带 ,大小与FC的计算分子量相吻合。但表达产物以包涵体形式存在。经洗涤与变复性后 ,重组FC在体外表现出明显的抑菌活性。同时蛋白质印迹实验也提示了在大肠杆菌中FC的单基因表达物可能发生部分自剪切反应 ,而形成了额外的免疫印迹条带

主 题 词：东方鲎C因子 克隆 表达 抑菌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

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馆 藏 号：203264799...