人端粒酶逆转录酶基因沉默对卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响及其机制

作     者：罗祎 姚珍薇 杨雅莹 易永芬 LUO Yi;YAO Zhen-wei;YANG Ya-ying;YI Yong-fen

作者机构：重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016 重庆医科大学病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 

基　　金：教育部博士点基金(20060631006) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2011年第24卷第7期

页      码：749-756页

摘      要：目的检测人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因沉默对卵巢癌细胞株A2780生长抑制和凋亡的影响,并探讨其与p53、p21基因表达激活的相关性。方法设计合成针对hTERT基因的shRNA干扰质粒,与可表达荧光蛋白的pGenesil-1.1质粒连接,构建重组质粒pG1、pG2和阴性质粒pGCR,转染A2780细胞,采用荧光定量RT-PCR检测转染细胞hTERT基因mRNA的表达,Western blot检测细胞hTERT、P53和P21蛋白的表达,TRAP法检测细胞的端粒酶活性,CCK-8法检测细胞的生长,流式细胞术分析细胞周期,AnnexinⅤ-PE/7AAD双染和TUNEL法检测细胞凋亡。结果酶切及测序结果证实重组质粒pG1、pG2和pGCR构建正确,质粒pG1和pG2转染可明显下调A2780细胞hTERT的表达水平和端粒酶活性,而上调细胞P53和P21蛋白的表达水平;沉默hTERT基因表达能够引起A2780细胞的生长抑制和G0-G1期细胞比例明显下降,并出现明显的细胞凋亡。结论针对hTERT基因的shRNA干扰质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌A2780细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关。

主 题 词：人端粒酶逆转录酶 基因沉默 卵巢肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 0703[理学-化学类] 100214[100214] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2011.07.6.luoy.022

馆 藏 号：203264924...