猪杀菌/通透性增加蛋白基因siRNA载体构建及干扰效果评价

作     者：吴正常 殷学梅 夏日炜 孙寿永 朱国强 吴圣龙 包文斌 WU Zheng-chang;YIN Xue-mei;XIA Ri-wei;SUN Shou-yong;ZHU Guo-qiang;WU Sheng-long;BAO Wen-bin

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 扬州大学兽医学院扬州225009 

基　　金：国家自然科学基金(31172183 31140027) 转基因生物新品种培育科技重大专项(2014ZX08006-001B) 江苏省科技支撑计划(BE2012330 BE2013345 BE2014357) 江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2015年第46卷第3期

页      码：491-496页

摘      要：本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)BPI基因的高效siRNA干扰载体,为在细胞水平上研究猪BPI基因的功能和作用机制提供基础。参照猪BPI基因(GenBank登录号:EF436278)全长编码区序列,设计其特异性发夹siRNA干扰片段,并将其克隆插入pcDNA 6.2-GW/EmGFPmiR干扰载体中,构建猪BPI基因4个干扰siRNA表达载体RB1、RB2、RB3和RB4,1个阴性对照NC,并通过PCR和测序进行验证,构建成功后转染猪小肠上皮细胞IPEC-J2并检测其干扰效率。结果发现,所构建的4个特异性siRNA载体均可显著降低猪BPI基因mRNA表达(P<0.05),其中RB4载体干扰效果最好,其干扰效率达到69%。本研究成功筛选可靶向干扰猪BPI基因的高效siRNA,为今后在细胞水平进一步研究BPI基因对猪肠道革兰阴性菌感染抗性的作用及其机制奠定了试验基础。

主 题 词：猪 BPI基因 siRNA载体 RNA干扰 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2015.03.020

馆 藏 号：203265346...