致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：武鑫 张宇霞 史晗 曾巧英 李儒 WU Xin;ZHANG Yu-xia;SHI Han;ZENG Qiao-ying;LI Ru

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃出入境检验检疫局甘肃兰州730010 中国农业大学动物医学院北京100083 

基　　金：国家自然科学基金项目(31260616) 甘肃农业大学伏羲杰出人才项目 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2015年第45卷第3期

页      码：270-274页

摘      要：为建立一种灵敏、特异、快速地检测食品中致病性沙门菌的方法,针对沙门菌致病性菌株特有的invA基因设计引物,PCR扩增目的片段,构建重组质粒pMD19-T-inv285,将其作为标准品进行real-time PCR反应体系的优化和标准曲线的绘制,并进行灵敏度、特异性及稳定性检测;同时用该方法对90份肉品样品进行检测。结果显示,建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线方程为y=-3.397 1 x+27.313,相关系数r2=0.999 6。该方法的灵敏度为5×100copies/μL,是普通PCR(5×102 copies/μL)的100倍。对10种常见食源性细菌的检测结果均为阴性;组内和组间重复试验的变异系数均低于1%。对90份肉品样品的检出率(6/90,6.67%)显著高于快速MALDI-TOF-MS法和传统的细菌分离鉴定方法(均为3/90,3.33%)。结果表明,本试验建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR灵敏度高,且特异、稳定,适用于食品中致病性沙门菌的快速检测。

主 题 词：沙门菌 实时荧光定量PCR MALDI-TOF-MS 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2015.03.007

馆 藏 号：203265814...